Verschiedene Qualitätsstufen für Forschung und den (prä-) klinischen Bereich ermöglichen eine optimale Anpassung an Ihre Anwendung. Unsere High Quality Grade Qualitätsstufe ist besonders geeignet für die GMP-konforme Produktion von z.B. viralen Vektoren und RNA.
Bitte beachten Sie im Voraus: Die Mindestbestellmenge für diese Qualitätsstufe beträgt 10 mg pro Plasmid.
High Quality Grade
High Quality Grade Plasmid-DNA kann analog der EMEA-Richtlinien CHMP/BWP/2458/03 und CPMP/BWP/3088/99 für höchste Qualitätsansprüche produziert werden. Das Herstellungsverfahren verzichtet aus Gründen der Produktsicherheit im gesamten Prozess auf den Einsatz von Substanzen tierischen Ursprungs und garantiert eine größtmögliche Produktreinheit durch zuverlässige Abtrennung von Verunreinigungen, z.B. bakterielle chromosomale DNA oder beschädigte Plasmide. Um weitere Kontaminationen zu verhindern, wird immer nur ein Plasmid in der ausschließlich für High Quality Grade Plasmide verwendeten Anlage produziert, es finden keine parallelen Plasmidproduktionen in einem Raum statt.
Die High Quality Grade Plasmid-DNA wird auf Basis einer bei PlasmidFactory erstellten Zellbank (RCB) und der besonders wirksamen patentierten ccc Grade DNA Technologie produziert. Sowohl für die Zellbank als auch für das Plasmid-DNA-Produkt bietet PlasmidFactory eine Vielzahl von Qualitätskontrollen an, so dass schließlich ein auf die jeweilige Anwendung bzw. die entsprechenden behördlichen Vorgaben maßgeschneidertes Produkt entsteht.
Unsere High Quality Grade Plasmid-DNA wird beispielsweise bei der GMP-konformen Herstellung von rekombinanten Viren, Antikörpern und RNA für klinische Studien eingesetzt.
Bitte beachten Sie im Voraus: Die Mindestbestellmenge für diese Qualitätsstufe beträgt 10 mg pro Plasmid.
Bestellvorgang
PlasmidFactory hat bereits über 2.000 individuelle, unterschiedliche Plasmide im Kundenauftrag hergestellt. Wir garantieren Ihnen die Auslieferung der bestellten Menge.
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Background
Plasmid-Topologie
Plasmide können verschiedene Konformationen annehmen: covalently closed circular (ccc), open circular (oc) und eine linearisierte Form. Die einzig zuverlässig aktive Konformation ist die ccc-Form (siehe Abbildung A). PlasmidFactory stellt hochreine DNA her, deren Qualität deutlich über der von Kit-basierten Systemen liegt. Mit der von uns entwickelten einzigartigen Kapillargelelektrophorese (CGE)-Technologie kann der Anteil der ccc-Form überprüft und quantifiziert werden. Die CGE-Analyse kann optional für jede Plasmidproduktion oder auch unabhängig davon für externe DNA-Proben in Auftrag gegeben werden. Sie dokumentiert den Grad der Plasmidhomogenität – ein Parameter, der nicht nur von praktischem Interesse zur Erzielung optimaler Transfektionsergebnisse sondern auch aus pharmazeutischer Sicht erforderlich ist. Die Hauptkontamination von Kit-basierter Plasmid-DNA – bakterielle chromosomale DNA – kann mit diesem Verfahren nicht quantifiziert werden.
Abbildung A
Bakterielle chromosomale DNA
PlasmidFactory verwendet ausschließlich charakterisierte und optimierte spezielle E. coli-Stämme für die Herstellung der Plasmid-DNA. Das patentierte Verfahren zum Aufschluss von plasmidhaltigen Zellen basiert auf der alkalischen Lyse. Ein bekanntes Problem bei der anschließenden Aufreinigung mittels einer gewöhnlichen Ionenaustausch-Chromatographie (Plasmid-Kits) ist die Verunreinigung mit bakteriellen Chromosomen-Bruchstücken (häufig irrtümlich „genomische DNA“ genannt, da auch Plasmide Teil des Genoms sind), welche ebenso wie Plasmid-DNA spezifisch oder unspezifisch an das Säulenmaterial binden. Im weiteren Verlauf der Plasmidextraktion wird diese bakterielle chromosomale DNA dann häufig nicht weiter vom Plasmid getrennt. So kommt es zu einer hohen Verunreinigung mit bakterieller DNA, die zum einen die Messung der Plasmidkonzentration signifikant verfälschen kann und zum anderen u. U. zu Immunreaktionen des Ziel-Expressionssystems führt und damit den Erfolg Ihrer Experimente gefährdet. PlasmidFactory‘s ccc Grade DNA-Qualitäten sind praktisch frei von bakterieller DNA (siehe Abbildung B), bei unseren übrigen Qualitäten (Research Grade) ist der Gehalt dieser unerwünschten Kontamination gegenüber den Kit-basierten Systemen deutlich verringert. Dem Kunden steht darüber hinaus die quantitative Analyse der bakteriellen chromosomalen DNA (qPCR) zur Verfügung.
Abbildung B
LPS-Lipopolysaccharide
Lipopolysaccharide (LPS), häufig als Endotoxine bezeichnet, werden von gramnegativen Bakterien gebildet und vom Immunsystem eukaryotischer Organismen erkannt. Dies kann eine Immunreaktion stimulieren und zur Verminderung der Genexpression führen. Bei den gängigen Kit-Präparationen kann der LPS-Gehalt sehr stark schwanken und das Ergebnis des Experiments unerwünscht beeinflussen. PlasmidFactory führt bei jeder Plasmid-Herstellung eine Messung des LPS-Gehalts durch und kann auf Wunsch einen Gehalt von weniger als 0,1 E.U./µg DNA garantieren. Damit liegen die Werte unter denen aller anderen Herstellungsverfahren.
Besondere Qualitätsmerkmale
PlasmidFactory hat ein spezielles Herstellungsverfahren für Plasmid-DNA entwickelt (ccc Grade classic), das generell auf den Einsatz von Substanzen tierischen Ursprungs verzichtet. Die Vermeidung des Einsatzes von tierischen Bestandteilen ist für klinische Anwendungen von Bedeutung, für die diese Substanzen ein Sicherheitsrisiko darstellen können.
Darüber hinaus wird bei der Produktion und Aufreinigung komplett auf die Verwendung von Enzymen verzichtet, indem die RNA chromatographisch entfernt wird.
Die Plasmid-Vermehrung in E. coli-Zellen erfolgt bei PlasmidFactory stets im Fermenter (siehe Abbildung C) und unter kontrollierten Bedingungen, da bei der Verwendung von Schüttelkolben die Reproduzierbarkeit der erzeugten Biomasse nicht garantiert werden kann. Die Qualität des Produkts wird stets überwacht und dokumentiert. Eine vollständige Liste der Qualitätskontrollen und Analytikmethoden finden Sie im Bereich Qualitätskontrolle.
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