LPS-Lipopolysaccharide
Lipopolysaccharide (LPS) werden von gram-negativen Bakterien gebildet und vom Immunsystem eukaryotischer Zellen erkannt. Dies kann eine Immunreaktion stimulieren und zur Verminderung der Genexpression führen. Bei den gängigen Kit-Präparationen kann der LPS-Gehalt sehr stark schwanken und das Ergebnis des Experiments unerwünscht beeinflussen. PlasmidFactory führt bei jeder Plasmid-Herstellung eine Messung des LPS-Gehalts durch und kann auf Wunsch einen Gehalt von weniger als 0,1 E.U./ µg DNA garantieren. Damit liegen die Werte unter denen aller anderen Herstellungsverfahren.
Besondere Qualitätsmerkmale
PlasmidFactory hat ein spezielles Herstellungsverfahren für Plasmid-DNA entwickelt, das generell weitestgehend auf den Einsatz von Substanzen tierischen Ursprungs verzichtet. Im Produktionsprozess kommt auf Wunsch eine rekombinante RNase zum Einsatz, wodurch die Herstellung komplett „tierfrei“ („animal-free“) abläuft. Die Vermeidung des Einsatzes von tierischen Bestandteilen ist für klinische Anwendungen von Bedeutung, für die diese Substanzen ein Sicherheitsrisiko darstellen können. Darüber hinaus ist es möglich, bei der Produktion und Aufreinigung komplett auf die Verwendung von Enzymen – also auch auf die RNase – zu verzichten, indem die RNA chromatographisch entfernt wird (Enzym-frei).
Die Plasmid-Vermehrung in E. coli-Zellen erfolgt bei PlasmidFactory stets im Fermenter und unter kontrollierten Bedingungen, da bei der Verwendung von Schüttelkolben die Reproduzierbarkeit der erzeugten Biomasse nicht garantiert werden kann. Die Qualität des Produkts wird stets überwacht und dokumentiert. Eine vollständige Liste der Qualitätskontrollen und Analytikmethoden finden Sie im Bereich Qualitätskontrolle.
Literatur
[1] M. Schleef, M. Blaesen (2009), Production of Plasmid DNA as a Pharmaceutical, in: W. Walther and U. S. Stein (eds.), Methods in Molecular Biology, Gene Therapy of Cancer, vol. 542: 471-495
[2] C. Maucksch, A. Bohla, F. Hoffmann, M. Schleef, M. K. Aneja, M. Elfinger, D. Hartl, C. Rudolph (2009), Transgene expression of transfected supercoiled plasmid DNA concatemers in mammalian cells, J Gene Med 11: 444-453
[3] M. Schleef, R. Baier, W. Walther, M.L. Michel, and M. Schmeer (2006), Long-Term Stability Study and Topology Analysis of Plasmid DNA by Capillary Gel Electrophoresis
BioProcess International, September 2006, 38-40
[4] M. Schleef, T. Schmidt (2004), Animal-free production of ccc-supercoiled plasmids for research and clinical applications, J Gene Med 6: 45-53
[5] W. Walther, U. Stein, I. Fichtner, C. Voss, T. Schmidt, M. Schleef, T. Nellessen, P. M. Schlag (2002), Intratumoral Low-Volume Jet-Injection for Efficient Nonviral Gene Transfer, Molecular Biotechnology 21: 105-115
